Charakterisierung zellulärer Interaktionspartner des großen Hüllproteins des Hepatitis-B-Virus.
| العنوان: | Charakterisierung zellulärer Interaktionspartner des großen Hüllproteins des Hepatitis-B-Virus. |
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| بيانات النشر: | 10: Biologie. 10: Biologie 2009. |
| تفاصيل مُضافة: | Awe, Karin |
| مستخلص: | Im Mittelpunkt dieser Arbeit stand das große L-Hüllprotein (L) des Hepatitis B - Virus. L bildet eine ungewöhnliche duale Topologie in der ER-Membran aus, welche auch im reifen Viruspartikel erhalten bleibt. In einem partiellen, posttranslationalen Reifungsprozess wird die sogenannte PräS-Region von der zytosolischen Seite der Membran aus in das ER-Lumen transloziert. Aufgrund seiner dualen Topologie und der damit verbundenen Multifunktionalität übernimmt L eine Schlüsselfunktion im viralen Lebenszyklus. Ein Schwerpunkt dieser Arbeit lag deshalb darin, neue zelluläre Interaktionspartner des L-Hüllproteins zu identifizieren. Ihre Analyse sollte helfen, das Zusammenspiel des Virus mit der Wirtszelle besser zu verstehen. Hierfür wurde das Split - Ubiquitin Hefe - Zwei - Hybrid System eingesetzt, das die Interaktionsanalyse von Membranproteinen und Membran-assoziierten Proteinen ermöglicht. Zwei der neu identifizierten Interaktionspartner, der v-SNARE Bet1 und Sec24A, die Cargo-bindende Untereinheit des CoPII-vermittelten vesikulären Transports, wurden weitergehend im humanen Zellkultursystem untersucht. Sowohl für Bet1 als auch für Sec24A konnte die Interaktion mit dem L-Hüllprotein bestätigt und der Bindungsbereich eingegrenzt werden. Die Depletion des endogenen Bet1 reduzierte die Freisetzung L-haltiger, nicht aber S-haltiger subviraler Partikel (SVP) deutlich. Im Gegensatz zu Bet1 interagierte Sec24A auch mit dem mittleren M- und kleinen S-Hüllprotein von HBV. Die Inhibition des CoPII-vermittelten vesikulären Transportweges durch kombinierte Depletion der vier Sec24 Isoformen blockierte die Freisetzung sowohl L- als auch S-haltiger SVP. Dies bedeutet, dass die HBV - Hüllproteine das ER CoPII-vermittelt verlassen, wobei sie aktiv Kontakt zur Cargo-bindenden Untereinheit Sec24A aufnehmen. Der effiziente Export der Hüllproteine aus dem ER ist für die Virusmorphogenese und somit für den HBV - Lebenszyklus essentiell. rnEin weiterer Schwerpunkt dieser Arbeit basierte auf. The focus of interest of this thesis was the large L envelope protein of the hepatitis B virus. L forms an unusual dual topology at the endoplasmic reticulum (ER) membrane which is preserved in the mature virus particle. In a partial posttranslational maturation process the so-called preS-region is translocated from the cytosolic side of the membrane into the ER lumen. Due to its dual topology and the resulting multifunctionality L has a key role in the viral life cycle. Therefore, one priority of this thesis was to identify new cellular interaction partners of the L envelope protein. Their investigation should help to better understand the interplay between the virus and its host cell. For this purpose, the split-ubiquitin yeast two-hybrid system which allows the analysis of protein-protein interactions between membrane proteins and membrane-associated proteins was used. Two of the newly identified interaction partners, the v-SNARE Bet1 and Sec24A, the cargo-binding subunit of the COPII-dependent vesicular transport, were further investigated using human cell culture techniques. For both, Bet1 and Sec24A, the interaction with the L envelope protein could be confirmed and the binding site could be narrowed down. Depletion of endogenous Bet1 reduced the release of L- but not S-containing subviral particles (SVP). In contrast to Bet1, Sec24A also interacted with the HBV middle and small envelope protein. The inhibition of the COPII-dependent vesicular transport by combined depletion of the four Sec24 isoforms blocked the release of L- as well as S-containing SVP. This implicates that the HBV envelope proteins exit the ER mediated by the COPII-dependent transport machinery making contact to the cargo-binding subunit Sec24A. The efficient ER-export of the envelope proteins is essential for viral morphogenesis and therefore the HBV life cycle. rnThe second point of interest of this thesis was based on the interaction of the L envelope protein with the ER luminal chaperon. |
| مصطلحات الفهرس: | Hepatitis B-Virus, duale Topologie, L-Hüllprotein, Interaktionspartner, hepatitis B virus, dual topology, large envelope protein, interaction partner, Life sciences, Thesis. Doctoral., Academic theses., Academic theses. |
| URL: | |
| الإتاحة: | Http://ubm.opus.hbz-nrw.de/doku/urheberrecht.php. |
| ملاحظة: | Application/pdf. German. |
| أرقام أخرى: | M7U oai:ubm.opus.hbz-nrw.de:2108 urn:nbn:de:hebis:77-21086 697640922 |
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